如何提高原代心肌細胞的存活率？

　　以下是一些提高原代心肌細胞存活率的方法：

　　

　　一、優(yōu)化細胞分離與純化過程

　　

　　1、選擇合適的酶及濃度：使用合適的消化酶組合，如胰蛋白酶和Ⅱ型膠原酶等，并控制好酶的濃度和消化時間。過高的酶濃度或過長的消化時間可能會對心肌細胞造成損傷，而過低的酶濃度或過短的消化時間則可能導致細胞分離不全。例如，對于乳鼠心肌組織的消化，采用0.1%的Ⅱ型膠原酶消化出生第1天的乳鼠心肌組織，能夠獲得較好的細胞分離效果且對細胞的損傷較小。

　　

　　2、差速貼壁分離法：利用成纖維細胞比心肌細胞更容易貼壁的特點，將混合細胞接種于培養(yǎng)瓶中，讓成纖維細胞在一定時間內先貼壁，然后輕輕晃動培養(yǎng)瓶，使未貼壁的心肌細胞懸浮起來，再將其轉移到新的培養(yǎng)瓶中繼續(xù)培養(yǎng)，這樣可以有效去除成纖維細胞等雜質細胞，提高心肌細胞的純度和存活率。

　　

　　3、化學抑制法：在培養(yǎng)基中添加適量的化學抑制劑，如溴脫氧尿苷（BrdU）等，可以抑制成纖維細胞等非心肌細胞的增殖，從而間接提高心肌細胞的相對比例和存活率。

　　

　　二、適宜的培養(yǎng)環(huán)境

　　

　　1、培養(yǎng)基的選擇：使用適合心肌細胞生長的培養(yǎng)基，如DMEM、M199等，并根據心肌細胞的特性添加適量的血清、氨基酸、維生素、生長因子等營養(yǎng)成分。血清濃度一般選擇10%-20%，避免血清濃度過高或過低影響細胞生長。

　　

　　2、氣體環(huán)境：心肌細胞培養(yǎng)需要適宜的氣體環(huán)境，一般為95%空氣和5%二氧化碳的混合氣體，以維持培養(yǎng)液的pH值穩(wěn)定在7.2-7.4之間。同時，要注意培養(yǎng)箱內的氧氣濃度，避免過高或過低的氧氣對心肌細胞造成損傷。

　　

　　3、溫度和濕度：保持培養(yǎng)箱內的溫度恒定在37℃左右，濕度在95%以上，為心肌細胞提供一個穩(wěn)定的生長環(huán)境。

　　

　　4、細胞接種密度：合適的細胞接種密度對于心肌細胞的生長和存活至關重要。如果接種密度過高，細胞之間會相互競爭營養(yǎng)和空間，導致細胞生長受限；如果接種密度過低，細胞則難以形成良好的細胞間連接和相互作用，影響其存活和功能。一般來說，原代心肌細胞的接種密度在每平方厘米1×10?-1×10?個細胞之間較為合適。

　　

　　三、減少機械損傷

　　

　　1、溫和操作：在細胞分離、接種、換液等操作過程中，要動作輕柔，避免對細胞造成不必要的機械損傷。使用合適的移液器和吸管，減少液體流動對細胞的沖擊。

　　

　　2、避免頻繁換液：盡量減少換液的次數，以免因換液過程中的操作對細胞產生損傷。但如果培養(yǎng)液中的營養(yǎng)物質消耗殆盡或代謝產物積累過多，也需要適時進行換液。

　　

　　四、添加保護劑或藥物

　　

　　1、抗氧化劑：在培養(yǎng)基中添加適量的抗氧化劑，如維生素C、維生素E、谷胱甘肽等，可以清除細胞內的自由基，減少氧化應激對心肌細胞的損傷，提高細胞的存活率。

　　

　　2、抗凋亡藥物：添加一些抗凋亡藥物，如Bcl-2家族蛋白的激動劑等，可以抑制心肌細胞的凋亡，延長細胞的生存時間。

　　

　　提高原代心肌細胞存活率需從多方面入手，包括優(yōu)化細胞分離與純化過程、提供適宜的培養(yǎng)環(huán)境、控制細胞接種密度、減少機械損傷以及合理添加保護劑或藥物等。這些措施共同作用，可有效提升原代心肌細胞的存活率，為后續(xù)的研究和應用提供可靠的細胞資源。